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如何運(yùn)用BLS細(xì)胞融合儀及胚胎聚集針創(chuàng)建胚胎

日期:2025-07-03 21:27
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摘要:

 

注射器內(nèi)吸入培養(yǎng)基,在35mm組織培養(yǎng)板上微滴(大致直徑3mm)點(diǎn)樣成若干行(列)。向培養(yǎng)板內(nèi)小心注入石蠟油使其覆蓋整板,注意不要使石蠟油直接傾倒在微滴上。石蠟油很容易越過(guò)這些微滴。石蠟油的量要完全覆蓋這些微滴。

使用配件按照說(shuō)明操作,制作凹陷。

 

37度,5%CO2條件下孵育培養(yǎng)板幾小時(shí),目的是讓培養(yǎng)基在液滴內(nèi)達(dá)到平衡。這一步可以在形成凹陷的步驟之前進(jìn)行。

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備好待聚集的細(xì)胞,組織或胚胎,不要將它們長(zhǎng)時(shí)間暴露在室溫下或脫離*適培養(yǎng)條件時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。通過(guò)在組織培養(yǎng)板蓋上加入幾滴M2培養(yǎng)基和Tyrode’s酸溶液來(lái)去除卵透明帶。將組織培養(yǎng)板的培養(yǎng)區(qū)域表面如此處理后,胚胎將本能的黏附在表面—因此我們需要使用蓋。確認(rèn)所有培養(yǎng)基溶液和酸液都接近室溫。將胚胎放置在一滴M2培養(yǎng)基上。取盡可能少的內(nèi)含10-20個(gè)胚胎的培養(yǎng)基,并移到一滴酸液上。重復(fù)這個(gè)步驟并將胚胎移到新的一滴酸液上。讓胚胎在吸頭內(nèi)保持上下移動(dòng),觀察卵透明帶是如何溶解的。迅速將胚胎移入M2培養(yǎng)基。用幾滴培養(yǎng)基溶液洗滌并移入剛才制成的凹陷中。

胚胎培養(yǎng)條件是聚集產(chǎn)量的一個(gè)重要因素,因?yàn)榕咛ヒ囵B(yǎng)過(guò)夜,如果是四倍體胚胎在移入母體前需要培養(yǎng)48小時(shí)。在培養(yǎng)的每個(gè)細(xì)節(jié)都必須小心操作控制。這包括溫度,大氣,培養(yǎng)基,室溫操作時(shí)間及礦物油質(zhì)量。

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